Плр діагностика - аналіз на інфекції

Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) - високоточний метод молекулярно-генетичної діагностики, який дозволяє виявити у людини різні інфекційні та спадкові захворювання, як в гострій і хронічній стадії, так і задовго до того, як захворювання може себе проявити.

Полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) в 1983 році розробив Кері Мюлліса (США), за що в 1993 році він удостоєний Нобелівської премії в галузі хімії.

ПЛР аналіз став для більшості інфекцій своєрідним "золотим стандартом". Більшість фахівців стикаються з ним практично щодня і не уявляють без нього постановку остаточного діагнозу. ПЛР нерідко стає єдиною реакцією для виявлення активних стадій захворювання в ті моменти, коли не спрацьовують інші бактеріологічні, вірусологічні, імунологічні методи діагностики.

Переваги ПЛР-діагностики в сучасній медицині:

• Безпосереднє виявлення присутності збудника (а саме, специфічної ділянки ДНК або РНК збудника) в досліджуваному зразку.
• Висока специфічність дозволяє визначати унікальна ділянка ДНК або РНК, характерний для конкретного збудника, що виключає можливість помилкових реакцій.
• Висока чутливість методу ПЛР дозволяє виявити навіть поодинокі клітини збудників (вірусів, бактерій). Чутливість ПЛР-аналізу складає 10-1000 клітин в досліджуваному зразку (наприклад, чутливість імунологічних і мікроскопічних тестів - всього 103-105 клітин).
• Розробка універсальної методики ПЛР для виявлення різних збудників. Об`єктом для дослідження методом ПЛР є генетичний матеріал (ДНК, РНК) збудника. Методика дозволяє виявляти кілька збудників з однієї біологічної проби.
• Досить швидке отримання результату аналізу. Повне дослідження проводиться за 4-4,5 години, рідше - кілька довше.
• Можливість виявлення патогенів до виникнення симптомів захворювання (доклінічна діагностика) і після минулої хвороби (ретроспективна діагностика). Прикладом доклінічній діагностики буде обстеження в інкубаційний період (з моменту зараження до виникнення скарг хворого), а також латентна інфекція (коли симптомів немає зовсім, а є тільки лабораторні дані - ПЛР, наприклад). Одним з важливих моментів ПЛР-діагностики є проведення ПЛР в архівному матеріалі або біологічних залишках, що важливо для ідентифікації особи або батьківства.

Відео: ІФА і ПЛР - помилкове діагностування ВІЛ та інших інфекцій.

В даний час ПЛР-діагностика піддається суттєвому розвитку. Відбувається вдосконалення самого методу, знову і знову з`являються нові різновиди ПЛР, на медичний ринок надходять нові тест-системи для даної реакції. Завдяки цьому вартість ПЛР-досліджень з кожним роком стає доступнішим для широкого кола пацієнтів.

На чому заснований метод ПЛР

Основою полімеразно-ланцюгової реакції є багаторазове подвоєння (ампліфікація) певної ділянки ДНК або РНК за допомогою ферментів в лабораторних умовах. В результаті утворюється то кількість ДНК або РНК, достатню для візуального аналізу. В ході дослідження копіюється лише ту ділянку, який підходить під задані умови, і тільки в ситуації присутності його в досліджуваній пробі.

Наприклад, матеріал для дослідження, в якому передбачається наявність фрагментів ДНК або РНК збудника (слина, кров, сеча, виділення зі статевих органів), поміщається в спеціальний реактор (ампліфікатор). Далі до нього додаються специфічні ферменти, які зв`язуються з ДНК або РНК патогена, і відбувається синтез її копії. Це копіювання йде в кілька етапів за типом "ланцюгової реакції", І в кінцевому підсумку з однієї копії генетичного матеріалу можуть утворитися сотні і тисячі копій. Потім йде аналіз і порівняння результату з наявною базою даних про будову різних збудників. За допомогою ПЛР можна не тільки виявити тип збудника, але і видати кількісний результат аналізу, тобто як багато збудників в організмі людини.

Метод ПЛР в даний час розширює коло можливостей проведених досліджень: введення мутацій, зрощення фрагментів ДНК, і набув широкого поширення в медицині, наприклад, для встановлення батьківства, поява нових генів та інше.

Відео: Діагностика інфекцій аналізом ПЛР що це таке? (полімеразна ланцюгова реакція)

Які інфекції можна виявити за допомогою ПЛР-діагностики

1) ВІЛ-інфекція (можна виявити вірус імунодефіциту людини ВІЛ-1)
2) Вірусні гепатити А, В, С, G (РНК-HAV, ДНК-HBV, РНК-HCV, РНК-HGV)
3) Інфекційний мононуклеоз (ДНК вірусу Епштейн-Барр -ВЕБ)
4) Цитомегаловірусна інфекція (ДНК-CMV)
5) Герпетична інфекція (ДНК вірусу простого герпесу ВПГ 1 і 2 типу)
6) ІПСШ (інфекції, що передаються статевим шляхом) - уреаплазмоз, гарднерельоз, хламідіоз, мікоплазмоз, трихомоніаз,
7) Туберкульоз (мікобактерія туберкульозу)
8) Онкогенні віруси - папіломавірусна інфекція (вірус папіломи людини (в тому числі його онкогенні види 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58, і 59)
9) Бореліоз, кліщовий енцефаліт
10) Лістеріоз
11) Кандидоз (гриби роду Candida)
12) Гелікобактерна інфекція (Helicobacter pylori)
та інші

З огляду на спектр збудників, ПЛР-діагностика активно використовується в гінекологічній, урологічній практиці, практиці інфекціоніста, в пульмонології, фтизіатрії, гастроентерології, гематології, онкології та інших.

Матеріал для дослідження і правила його забору

Матеріалом для ПЛР-дослідження, в якому можна виявити чужорідну ДНК бактерії або ДНК або РНК вірусу можуть служити різні біологічні середовища та рідини людини: слизу, сечі, крові, мокротинні, соскобе епітеліальних клітин, тканинах плаценти, крові, соку простати, навколоплідні води, плевральна рідина.

При обстеженні на інфекції, що передаються статевим шляхом (ІПСШ), у чоловіків і жінок забираються виділення зі статевих органів, мазок або зішкріб з шийки матки, мазок або зішкріб з уретри (сечовипускального каналу), сеча.

При обстеженні на інфекції (герпетичні інфекції, ЦМВІ, мононуклеоз, токсоплазмоз, гепатити В, С, ВІЛ-інфекція) на ПЛР забирають кров.

Для діагностики інфекційного мононуклеозу, ЦМВІ, герпетичної інфекції забирається мазок із зіву, для обстеження на ЦМВІ - сеча. Нерідко для обстеження на ураження нервової системи при ряді досліджень забирається спинномозкова рідина.

У пульмонології матеріалом служить мокрота, плевральна рідина.

При обстеженні на внутрішньоутробні інфекції - навколоплідні води, тканини плаценти.

Підготовка до здачі матеріалу і проведення ПЛР-діагностики

Практично всі пацієнти, яким проводиться ПЛР-діагностика, вправі розраховувати на достовірний, точний і швидкий результат, залежить у великій мірі від можливості лабораторії, професіоналізму лікаря-лаборанта. Разом з тим, багато хто не замислюються, що ця сама достовірність багато в чому залежить і від нас самих, а саме від рекомендацій лікуючого лікаря, способу життя і правильності забору матеріалу. При заборі матеріалу потрібні умови, що виключають контамінацію (забруднення) матеріалу і, відповідно, ставлять під сумнів об`єктивність аналізу.

Правильна підготовка до здачі матеріалу не представляє особливих складнощів. Існують наступні рекомендації лікарів для пацієнтів:

1) не жити статевим життям за добу до здачі матеріалу-
2) кров для дослідження здається вранці натщесерце (не їсти, не пити) -
3) при здачі сечі збирається перша ранкова порція в чистий стерильний контейнер.

Терміни готовності ПЛР-аналізу

Остаточний результат готовий через 1,5-2х діб після здачі матеріалу. У деяких випадках результат готовий в перший же день.

Розшифровка результатів ПЛР

негативний результат ПЛР вказує на те, що в досліджуваному матеріалі на момент його здачі не виявлено ніяких слідів інфекційних агентів. Більшість випадків показує відсутність інфекції, яку намагалися знайти в досліджуваній пробі.

позитивний результат ПЛР вказує на виявлення слідів інфекції в досліджуваній біологічної пробі. З великою точністю позитивний результат вказує на наявність інфекції в даний момент часу.

Існують ситуації, коли ПЛР виявляється позитивною, а про активну інфекції говорити не можна - це так зване "здорове носійство" без клінічних симптомів хвороби, яке не потребує лікування, але вимагає динамічного спостереження у лікаря. Спостерігається частіше при ряді вірусних інфекцій (ВПЛ, ЦМВІ, ВЕБ-інфекція, герпетична інфекція та інші) в таких матеріалах як слина, зішкріб цервікального каналу, уретри, тобто з місцевого осередку. Однак не можна забувати, що передача інфекції від носіїв здоровим людям можлива, як і можливий перехід в хронічну форму хвороби з активацією процесу. Якщо ж ПЛР позитивна в крові, то це вже не носійство і потребує специфічного лікування.

Кількісний результат ПЛР оцінюється тільки лікарем індивідуально для тієї чи іншої інфекції окремо і не має загальних градацій. На підставі кількісного результату ПЛР лікар може встановити ступінь активності інфекції та виставити стадію хвороби, що безумовно позначиться на курсі і дозах призначених лікарських засобів.

Один з останніх хвилюючих питань: наскільки точна ПЛР-діагностика?

Для ПЛР аналізу існує 3 визначення:

1. Точність (з високою часткою ймовірності можливе виявлення або відсутність інфекції).
2. Специфічність (точність виявлення конкретної інфекції).
3. Чутливість (навіть при низькому вмісті генетичного матеріалу збудників в досліджуваному зразку інфекція буде виявлена).

Полімеразно-ланцюгова реакція практично не видає хибнопозитивних результатів (тобто не буває позитивних проб там, де інфекція відсутня). Помилково негативні результати спостерігаються рідко (частіше це пов`язано з відсутністю активної інфекції у людини в даний момент). Наприклад, латентна інфекція, хронічна інфекція поза активності.